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高效液相色譜法同時測定食品中多種合成色素的方法探究

文檔作者：李媛媛　劉慧芳　朱曉鋒　魏法山文檔來源：河南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院		點(diǎn) 擊數(shù)：	更新時間： 2025年06月06日
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上一篇：高效液相色譜技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用

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Sep 2015 CHINA FOOD SAFETY 111
分析與檢測
通過本實(shí)驗(yàn)建立一種高效液相色
譜法同時測定食品中的多種合成色素
的測定方法。以甲醇/ 乙腈（3+1）
+ 乙酸銨（0.02mol/L，pH=4.0） 為流
動相，梯度淋洗分離，多波長檢測定
量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該方法線性關(guān)系
良好，相關(guān)系數(shù)0.9997~0.9999，回收
率92.0%~99.5%，RSD 0.2%~1.4%， 由
于該法準(zhǔn)確省時，靈敏度高，適用于
食品中多種合成色素的定量分析。
引言
天然色素因光、熱、氧氣及化學(xué)
藥劑等因素的影響會出現(xiàn)褪色或變色
現(xiàn)象，使食品感官質(zhì)量下降。因此，
在食品生產(chǎn)中大都需要添加人工合成
色素。鑒于合成色素可能存在一定的
危害，我國對合成色素的使用范圍和
限量進(jìn)行了嚴(yán)格規(guī)定。GB/T 5009.35-
2003《食品中合成著色劑的測定》中
對食品中的合成色素的測定進(jìn)行了詳
細(xì)的說明。目前，國內(nèi)外用于合成色
素的分析方法主要有HPLC 法、HPLCMS
法等。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)相關(guān)資料在確定
最佳梯度后，對檢測條件進(jìn)行優(yōu)化，
更好地用于食品中多種合成色素進(jìn)行
分離檢測。
材料與方法
材料、試劑與儀器
市售葡萄酒等。
檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落
黃， 誘惑紅， 赤蘚紅和新紅標(biāo)準(zhǔn)品
(GBW(E)100001a ～ 5a) 中國計(jì)量科學(xué)研
究院。
甲醇( 色譜純) 美國 Fisher 公司。
高效液相色譜儀（Waters
Breeze2）美國Waters 公司。
Milli Q 純水儀 美國Millipore 公
司。
試驗(yàn)方法
試樣處理
液體樣品：稱取20.0g~40.0g，放
入100 mL 小燒杯中，加熱驅(qū)除殘酸飲
料里的二氧化碳和配制酒里的乙醇；
聚酰胺粉提取色素。
液相色譜分析條件
色譜柱：Waters-Breeze 2-C18 柱
（5μm，4.6 mm x 250 mm）。
流動相：以甲醇+ 乙腈（3+1）為
有機(jī)相，乙酸銨溶液（pH=4，0.02 mol/L)
為水相。
梯度洗脫：30 min 內(nèi)有機(jī)相先增
后減，水相先減后增進(jìn)行。
進(jìn)樣量：10 μL
紫外檢測器：采用多通道、多波
長檢測。
流動相的選擇
實(shí)驗(yàn)為分離測定多種合成著色劑，
以甲醇+ 乙腈（3+1）+0.02mol/L 乙酸
銨為流動相梯度洗脫時，可將7 種色
素進(jìn)行有效分離，且峰形良好，保留
時間穩(wěn)定。
結(jié)果與分析
方法的線性范圍
在設(shè)定的色譜條件下，7 種合成色
素的出峰情況見圖1，各色素標(biāo)準(zhǔn)系列
溶液的濃度與色譜峰面積線性相關(guān)，線
性范圍、線性方程及相關(guān)系數(shù)見表1。
注：1. 檸檬黃；2. 新紅；3. 莧菜紅；4. 胭脂紅；
5. 日落黃；6. 誘惑紅；7. 赤蘚紅。
由圖1 知，該方法測定7 種合成
色素時樣品峰得到了很好的分離，基
線穩(wěn)定，受雜質(zhì)峰的干擾小，出峰情
況較好。
高效液相色譜法同時測定食品中多種合成色素的
方法探究
□李媛媛　劉慧芳　朱曉鋒　魏法山　河南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院
圖1　7 種合成色素標(biāo)準(zhǔn)試樣色素圖
表1　7 種合成色素標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)
色素名稱保留時間（min） 線性范圍（μg/mL） 線性方程相關(guān)系數(shù)
檸檬黃3.44 5.00-20.00 y=1.0037x+0.0612 0.9997
新 紅3.83 7.50-30.00 y=1.0080x+0.0106 0.9998
莧菜紅4.68 5.00-20.00 y=0.9950x+0.1955 0.9999
胭脂紅4.95 5.00-20.00 y=1.0040x+0.0794 0.9997
日落黃5.36 5.00-20.00 y=0.9960x+0.1408 0.9999
誘惑紅6.38 8.00-32.00 y=1.0025x+0.0842 0.9999
赤蘚紅7.65 6.10-24.40 y=0.9978x+0.1037 0.9999
112 食品安全導(dǎo)刊 2015年9月
Technology
科技
分析與檢測
由表1 知，該方法的相關(guān)系數(shù)為
0.9997~0.9999，線性關(guān)系良好。
檢出限
檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃；
赤蘚紅；誘惑紅；新紅分別為0.06；0.08；
0.10 和0.90mg/kg。
回收率實(shí)驗(yàn)
以葡萄酒為樣品，進(jìn)行回收率試
驗(yàn)，測得檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、
日落黃、赤蘚紅、誘惑紅、新紅的本
底值分別為1.4、6.3、2.5、3.4、0、0
mg/kg； 以5~12.8μg/mL 的加標(biāo)量進(jìn)
行回收率實(shí)驗(yàn)，測得這7 種色素的回
收率在92.0% ~99.5% 之間，方法回收
率較高。
精密度實(shí)驗(yàn)
準(zhǔn)確精密量取葡萄酒樣品，加入
一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液混合配制成模
擬樣品，計(jì)算精密度，見表2。
由表2 知， 該方法的精密度為
0.2%~1.4%，方法精密度良好。
表2　方法的精密度
色素名稱檸檬黃新紅莧菜紅胭脂紅日落黃 誘惑紅 赤蘚紅
平均濃度（μg/mL） 4.96 7.47 4.85 4.86 4.9 7.89 5.89
相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%） 0.2 0.27 1.4 0.95 0.61 0.32 0.97
結(jié)論
本方法采用梯度洗脫，多波長同
時測定食品中的7 種合成色素，測定
結(jié)果顯示方法穩(wěn)定，測定結(jié)果的線性
范圍好，測定方法的精密度高，受雜
質(zhì)峰的干擾小，樣品峰得到了很好的
分離，適用于食品中合成色素的檢測
和定量分析。
作者簡介：李媛媛，碩士，助理
工程師，專業(yè)方向：食品安全檢測，
E-mail:lyy871120@126.com
通訊作者：魏法山，博士，高級
工程師，專業(yè)方向：食品安全檢測，

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